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單細胞水平如何進行基因表達分析?

作者:admin 信息來源:達科為 日期:20190612 打印 字體:  
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炎炎夏日,今天給大家介紹一款用于單細胞水平基因表達分析的神器。


基因表達 (gene expression) 是指細胞在生命過程中,把儲存在DNA中的遺傳信息經過轉錄和翻譯,轉變成具有生物活性的蛋白質分子(或RNA分子)。很多疾病的發生發展、很多藥物的作用機理、很多生物的代謝調控作用等都和基因表達的變化有關,因此對基因表達進行分析十分重要。由于基因表達是在單個細胞水平進行調控,所以需要用多種方法來分析單個細胞如干細胞、神經元、發育組織、激光捕獲切片的基因表達方式。

為了便于研究單細胞的基因表達,美國Signosis公司開發出一種基于SYBR Green的單細胞實時熒光定量RT-PCR檢測試劑,該試劑可以使用細胞裂解液直接檢測基因表達水平,無需RNA制備過程。

* SYBR Green是廣泛用于雙鏈DNA的特異性染料,常用作實時熒光定量PCR報告染料。

 

小編說了半天,下面正式Pick出今日介紹的主角:


貨號

產品名稱

規格

目錄價

品牌

CL-0003

單細胞實時熒光定量RT-PCR檢測試劑

10次

¥5,449

Signosis

與其他定量試劑盒相比,Signosis的試劑盒原理是什么?不同之處?優點是?

1)試劑盒包括cDNA合成和PCR擴增的所有試劑:

? 細胞裂解液(1mL)

? Oligo dT

? 隨機引物

? 反轉錄buffer預混液

? 反轉錄酶

? 對照引物

? SYBR Green PCR預混液


2)您只需要準備:目的基因特異性引物

3)不同之處在于:無需額外制備/提取細胞RNA


4)原理圖:


圖1 試劑盒原理:細胞裂解液裂解細胞后直接進行反轉錄及隨后的 PCR分析。 

5)結果展示:


圖2  A: 比較Signosis與其他品牌的細胞裂解液。分別對裂解產物中的β-actin進行30個循環反轉錄PCR。 


B: 基因組DNA污染檢測。Lane1:細胞裂解產物不經過反轉錄直接對β-actin進行36個循環PCR擴增;Lane2:細胞裂解液反轉錄獲得cDNA后對β-actin進行36個循環PCR擴增。 


圖3 細胞裂解產物中檢測靶基因。

隨著HeLa細胞數的增加,分別用適量細胞裂解液裂解細胞后進行反轉錄,而后在7700 PCR儀上進行Actin、GAPDH和B2M基因的3復孔qPCR反應。 

 

6)產品優點:

? 一站式 — 試劑盒包含了從細胞裂解、反轉錄到PCR的所有試劑

? 無需RNA制備 — 細胞裂解產物可直接用于反轉錄

? 功能強大 — 該試劑可獲得全長的cDNA

? 實時監控 — 整個分析過程可以實時監控

7)FAQs:

a. 細胞裂解液能使用幾次?

每個試劑盒里包含1mL的細胞裂解液:

待裂解細胞數

細胞裂解液用量/次

使用次數

1000-10000

50ul

20次

50-1000

20ul

50次

1-50

5ul

200次

b. 有沒有儀器要求?

兼容SYBR Green的PCR儀。


更多信息請點擊Signosis官網

www.signosisinc.com



Signosis(美國):是一家專業的生物試劑產品供應商,致力于基于微孔板分析技術的生命科學研究產品的開發、生產和銷售。Signosis成立于2007年,公司專注于細胞因子、轉錄因子、miRNA及疾病標志物等重要調控因子和標志物的研究,基于自有專利技術,開發完成400多種先進而獨特的用于發現、篩選和分析的生命科學研究產品。

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