“Fc Blocking”可以不做嗎？你是否經(jīng)常在流式染色實(shí)驗(yàn)中聽(tīng)到這樣的疑問(wèn)？

今天小達(dá)君就要給大家介紹一下什么是Fc 受體封閉劑，為什么需要做“Fc Blocking”。

在我們流式實(shí)驗(yàn)中，通常使用的抗體都是會(huì)有Fc段存在的，而細(xì)胞如果高表達(dá)Fc受體（比如巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞等），那么在抗體染色的過(guò)程中，很有可能抗體Fc段會(huì)與細(xì)胞表面的Fc受體進(jìn)行結(jié)合，從而產(chǎn)生非特異性的染色結(jié)果，最終導(dǎo)致流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽(yáng)性/假陰性的存在。

因此，在流式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，除非檢測(cè)細(xì)胞中Fc受體的表達(dá)，通常我們會(huì)使用純化的抗體來(lái)進(jìn)行Fc受體的封閉，如圖：

那么，是否你還有這樣的疑問(wèn)，我用BSA做封閉可以嗎？其實(shí)呢，BSA是牛血清白蛋白，可以理解為牛來(lái)源的Ab，存在Fc段，用BSA理論上也可以使細(xì)胞表面的FcR不再結(jié)合流式抗體的Fc段。但是，牛來(lái)源的抗體的Fc段不一定能和目的細(xì)胞（人源、鼠源等）表面的FcR結(jié)合，所以封閉作用是有限的。如圖，沒(méi)有使用封閉劑但使用了BSA跟使用封閉劑的染色結(jié)果差異會(huì)特別大：

（OCI-AML3細(xì)胞系用TruStainFcX（Cat#101319）封閉（紅色TruStainFcX直方圖）以及用5%BSA封閉（藍(lán)色BSA直方圖）后，染APC-CD11b（cat#101211,cloneM1/70）結(jié)果）

因此，Fc受體的封閉需要使用專(zhuān)門(mén)針對(duì)于目的細(xì)胞的抗體效果是比較好的。

現(xiàn)在，你知道為什么需要做Fc Blocking了吧？接下來(lái)，小達(dá)君要給大家簡(jiǎn)單介紹一下BioLegend最新推出的受體封閉劑TruStainFcX? PLUS（Cat#156603）。它可有效防止抗體與小鼠細(xì)胞的非特異的結(jié)合。其克隆號(hào)（clone：S17011E）染色結(jié)果更優(yōu)于之前的Fc受體封閉劑 TruStain FcX?（Cat#101319））克隆號(hào)（Clone:93），并且從抗體的用量上來(lái)說(shuō)大大減少，可節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。

（將小鼠脾臟細(xì)胞分別用TruStainFcX ^TM PLUS（0.25μg/test，紫色填充直方圖），TruStainFcX ^TM（克隆93,1μg/test，紅線）封閉之后用CD90.2FITC染色，與未處理的小鼠脾臟細(xì)胞（黑線）作比較。結(jié)果顯示TruStainFcX^TM PLUS封閉效果更優(yōu)。）

感興趣的話，趕快來(lái)試試吧！！！

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